今天，来为大家介绍一项在淋巴瘤、鼻咽癌等疾病诊断中不可或缺的成熟技术——EB病毒编码的小RNA（EBER）原位杂交检测。从病理科日常操作的实际经验出发，和大家聊聊这项技术的原理、临床应用以及对患者诊疗的指导意义。
一、EBER检测的技术原理：从分子层面精准定位EB病毒
很多人听到EB病毒都会觉得熟悉，它是一种普遍存在的人类疱疹病毒，90%以上的成人都曾经感染过EB病毒。但是大部分时候EB病毒都处于潜伏感染状态，并不会引发明显的疾病，只有当病毒激活或者和特定肿瘤发生关联的时候，才需要精准地检测出来。
在EB病毒的潜伏感染阶段，病毒基因组会整合到宿主细胞的细胞核中，这时候病毒并不会合成大量的结构蛋白，但是会高度表达两种非编码的小RNA分子，就是我们所说的EBER1和EBER2，合称为EBER。这两种小分子RNA在每个潜伏感染的EB病毒阳性细胞中，拷贝数可以达到惊人的10^6~10^7个，远远高于病毒编码的其他核酸分子，这也为检测提供了极高的靶点丰度，是检测EB病毒潜伏感染最理想的标志物。
病理科常用的EBER检测技术是原位杂交法，这项技术的原理说起来并不复杂：根据EBER特异性的核酸序列，合成带有标记物的互补核酸探针，探针进入组织细胞后，如果细胞内存在EBER，探针就会和靶点按照碱基互补配对原则特异性结合，形成杂交体，之后通过显色系统让杂交体显示出清晰的信号，最后在显微镜下直接观察，就能精准定位出哪些细胞感染了EB病毒，还能直观看到阳性细胞的分布和数量。
相比于其他检测EB病毒的方法，比如血清学检测EB病毒抗体、PCR检测外周血EB病毒DNA，EBER原位杂交有着不可替代的优势：血清学检测只能告诉你曾经感染过EB病毒，无法确定当前病灶组织中是否存在EB病毒感染；PCR虽然可以检测EB病毒核酸，但是只能得到整体的定量结果，无法确定感染到底发生在哪种细胞里，而我们的EBER原位杂交可以直接在组织切片上，定位到单个细胞水平的EB病毒感染，明确EB病毒是不是和病变细胞直接相关，这对疾病的诊断和分型来说至关重要，这也是为什么EBER检测成为了病理科诊断EB病毒相关疾病的金标准。
二、EBER检测的临床应用：覆盖多领域的诊断刚需技术
在日常病理诊断工作中，EBER检测的应用范围非常广泛，几乎所有怀疑和EB病毒感染相关的淋巴造血系统疾病、头颈部肿瘤都需要做这项检测，病理科每天都会收到不少需要加做EBER检测的会诊和常规样本，主要应用在以下几个方面：
1. 鼻咽癌的诊断与鉴别诊断
鼻咽癌是我国南方地区非常高发的头颈部恶性肿瘤，几乎所有的未分化型鼻咽癌都和EB病毒感染密切相关。在日常工作中，很多鼻咽癌原发灶非常小，往往表现为黏膜下浸润，常规活检取材的时候，很容易和鼻咽部的慢性炎症、淋巴组织增生、其他类型的恶性肿瘤混淆。这时候EBER检测就发挥了关键作用：如果病变细胞的细胞核出现清晰的EBER阳性信号，结合形态学就可以基本确定鼻咽癌的诊断，哪怕是原发灶不明显的病例，也能通过EBER阳性给出明确提示。病理科曾经遇到过颈部淋巴结转移癌，原发灶找不到，常规HE染色怀疑转移癌，做EBER检测癌细胞核阳性，就可以明确提示原发灶来自鼻咽部，帮助临床精准找到原发肿瘤，避免了患者做很多不必要的检查。
2. 淋巴瘤的诊断与分型
淋巴造血系统肿瘤是EBER检测应用最多的领域，不同类型的淋巴瘤和EB病毒的相关性差异很大，EBER检测结果是淋巴瘤分型的重要依据。
首先是NK/T细胞淋巴瘤，这种淋巴瘤好发于鼻腔，绝大多数NK/T细胞淋巴瘤都和EB病毒感染相关，几乎所有病例的肿瘤细胞都呈EBER阳性，这是诊断NK/T细胞淋巴瘤的必要指标。很多时候，淋巴瘤的形态不典型，免疫组化的结果也不典型，只要EBER检测显示肿瘤细胞阳性，结合部位和形态就能基本确立诊断。
除此之外，EB病毒相关的淋巴增生性疾病、经典型霍奇金淋巴瘤、部分弥漫大B细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发渗出性淋巴瘤等，都和EB病毒感染密切相关。比如免疫缺陷相关的淋巴增生性疾病，器官移植后或者HIV感染患者出现淋巴增生，EBER阳性可以帮助区分是反应性增生还是肿瘤性病变，对后续的治疗方案选择非常重要。在日常工作中，对于初诊的淋巴瘤病例，尤其是怀疑T细胞来源或者结外淋巴瘤，常规都会加做EBER检测，就是为了给分型提供准确的依据。
3. 其他EB病毒相关疾病的诊断
除了鼻咽癌和淋巴瘤，还有不少疾病也需要EBER检测辅助诊断：比如慢性活动性EB病毒感染，患者会出现长期发热、肝脾肿大，淋巴结活检做EBER检测可以看到大量淋巴细胞EB病毒阳性，帮助明确诊断；还有EB病毒相关的胃癌，大约有10%左右的胃癌和EB病毒感染相关，这种EB病毒阳性胃癌有着独特的临床病理特征和预后特点，检测EBER可以明确分型，指导后续治疗；另外还有腮腺的淋巴上皮癌、胸腺瘤等肿瘤，也和EB病毒感染有关，EBER检测可以帮助和其他类型的肿瘤鉴别。
作者：郭萍敬
编辑：杜乔乔
初审：蒋昊君 审核：张瀚文、宋大萍
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